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褐藻胶裂解酶提高海带降解后果的应用研究Appl(2)

时间:2020-03-23 09:54来源:原创 作者:admin 点击:

  称取600 g水,用NaOH或KOH疗养pH至8.5以上,水浴加热至45℃,称取60 g干海带全部浸入已预热好的碱性水中,45℃保温1 h,充沛搅拌10 min,然后再保温1 h,充沛搅拌10 min,如此轮回操作,直至海带全部硬化成海带浆,然后参与海带重量的0.1%褐藻胶裂解酶或2%复合酶或0.1%褐藻胶裂解酶 + 2%复合酶,45℃条件下300 r/min搅拌反应8 h,反应完毕后,升温至90℃灭酶30 min,冷却至室温后,4200 r/min 离心10 min,汇集上清液与海带渣。

  降粘后果监控 [18] :每隔1 h取10 mL的海带酶解液,于14,000 rpm下离心5 min后,取离心上清液,用蒸馏水稀释60倍,应用石英比色皿检测稀释上清液中酶解产品在235 nm的紫外接收值。以未加酶的样品作为参照。

  总糖及恢复糖含量监控:每隔1 h取样10 mL,水浴煮沸5 min,冷却至室温后离心(4200 r/min,10 min)分别渣液,取样品上清液,辨别采取苯酚-硫酸法和DNS法测定酶解液中总糖和恢复糖含量 [19] 。以未加酶的样品作为参照。

  海带酶解的率是指干海带酶解后溶于水的物质百分含量,计算公式以下:

  w

  =

  m

  0

  ?

  m

  m

  0

  ×

  100

  %

  w:海带酶解得率,%;m0:酶解用的干海带干重,g;m:酶解后所得海带渣的干重,g。

  依照“2.3.1 海带酶解工艺”对海带停止硬化处理后,在加酶前,先辨别参与水质量1.5%的NaCl、MgCl2、KCl、Na2SO4、FeSO4、CuSO4,搅拌至消融,然后参与海带重量的0.1%褐藻胶裂解酶或0.1%褐藻胶裂解酶 + 2%复合酶,45℃下300 r/min搅拌反应8 h,反应完毕后,升温至90℃灭酶30 min,冷却至室温后,4200 r/min离心10 min,汇集上清液与海带渣,计算海带酶解得率。两组辨别以加0.1%褐藻胶裂解酶和0.1%褐藻胶裂解酶 + 2%复合酶,不加离子的试验组作为参照。

  依照“2.3.1 海带酶解工艺”,海带酶解完毕后汇集海带酶解液,并稀释至可溶性固形物约10%摆布,然后检测个中的营养成分,主要包罗无机质 [20] ,甘露醇 [21] ,海藻酸 [22] ,葡聚糖 [23] ,岩藻糖 [24] ,蛋白质 [25] ,灰分 [26] ,碘 [27] ,氮、磷、钾 [28] ,钠 [29] ,铁、铜、锌、锰 [30] 。

  海带中的褐藻胶、果胶在降解过程会发生含有糖醛酸的寡糖或单糖,在紫外235 nm处具有吸光值,且随着反应系统粘度的降低,OD235值逐渐降低,因此以海带酶解上清液的OD235值作为海带酶解过程降粘后果的监控,结果见图1。

  由图1可知,参与褐藻胶裂解酶的两个试验组,在酶解停止1 h时,OD235值敏捷上升,酶解3 h以后OD235值末尾变更缓慢,褐藻胶裂解酶组的OD235值十分为0.861,褐藻胶裂解酶 + 复合酶组的OD235值十分为0.922;复合酶试验组的OD235值在全部酶解过程的变更都很缓慢,OD235值十分为0.179;未加酶试验组的OD235值在全部过程当中基本没有变更。褐藻胶裂解酶组和褐藻胶裂解酶 + 复合酶组辨别比复合酶组的OD235值提高381%和415%。

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